实验干货——提高CDX模型皮下荷瘤成功率,这些细节不容忽视
影响因素一:细胞
1.细胞系特性
各个癌上皮细胞株的成瘤速率有不同,意见与建议真正的实验设计操作已经大力开展预实验设计操作,任何癌上皮细胞株成瘤性,还分类已发文章。2.细胞状态
内部培训工作过程中 要还要注意以防被污染问题。支原体被污染问题甚为长见,会变动培训内部的组织代谢、分裂繁殖特点及型态等,最终得以影向癌肿发芽和但是的可重新性。建意接种疫苗前对内部开展支原健康检查测。组织组织组织充满活力是作用恶性肿瘤构成的重点情况,注射组织组织组织觉得取所处多数期生张的组织组织组织,注射前对组织组织组织活率展开检则,注射具体步骤中组织组织组织居于冰上运动,持续地温,注射完整后也会留一这部分组织组织组织检则组织组织组织活率,确保安全生产注射具体步骤中组织组织组织活率不会有显著的较低。并且,要注意制止身体之外过度紧张传代作用组织组织组织工作状态(通常情况下3-5代)。影响因素二:动物
选用的天然免疫细胞性检测不足小鼠品系有:裸鼠、NOD-Scid、NCG等。各不相同天然免疫细胞性检测不足系数的小鼠或小鼠各不相同周龄的成瘤转速有之间的关系,可以通过预实验操作毕竟选好的昆虫模型工具,也选取已发表论文的参考文献。选小鼠周龄不可以过大,如,裸鼠8周龄大于NK細胞等天然免疫细胞性检测細胞生命力就开始增強,通常情况并不是,4~6周龄的裸鼠更简易成瘤,这个时候天然免疫细胞性检测操作系统不是强,成瘤率相对而言较高。影响因素三:接种部位
皮内皮内注射其主要有4个位点(如下图提示图提示),提倡结合神经元株成瘤性和测试作用选择比较好的疫苗疫苗接种疫苗部件。正常会认为腋窝下皮内(3号位)血供充分,益于良性恶性肿瘤神经元增值,且右测实际操作较利于。若果某一瘤种产生的速度慢最快,会疫苗疫苗接种疫苗后肢或背脊等供血量并非很大充分的城市,或拉低神经元疫苗疫苗接种疫苗含水量,缓减良性恶性肿瘤产生的速度慢。影响因素四:接种量
不一样的的血肿瘤体细胞系、不一样的的小鼠和接种疫苗疫苗位址需要的要的血肿瘤体细胞服用量就有相互影响,最好开始实践开始之前开展业务预实践,接种疫苗疫苗量装置若干均值,任何出较佳血肿瘤体细胞注谢服用量。另外,可以根据细胞株类型选择实验中是否需要添加辅助因子,如matrigel、hormone等。如果成瘤性不好,可尝试在细胞悬液(PBS溶)中添加基质胶(根据说明书比例,一般体积比1:1,冰上操作),提供细胞外基质营养。卵巢癌一般均会加雌激素,接种细胞后单独注射雌激素。
影响因素五:饲养管理
小鼠饲养环境较差会影响小鼠状态,进而影响实验结果,严重时造成小鼠死亡。免疫缺陷小鼠对饲养环境的要求很高,必须饲养在SPF级屏障设施内,且与免疫正常小鼠饲养在不同房间。如果环境设施不达标,有可能会间接影响CDX模型的制备:裸鼠长期暴露在弱抗原的刺激下,NK细胞等免疫细胞的活力逐步增强,会导致裸鼠对肿瘤的非特异性免疫力增强;NCG及NCG相关背景品系是重度免疫缺陷模型,对病原体易感,饲养环境清洁消毒不足,会造成环境微生物富集,对这一类小鼠带来健康风险。