Cre工具鼠是一种基因敲除小鼠，可以通过Cre重组酶系统实现特定基因的敲除，在条件性靶基因功能研究、疾病模型研究等方面发挥着极大作用。而荧光报告Cre工具鼠作为Cre工具鼠的好搭档，又有哪些用途呢？集萃ob电竞官网入口 带你一探究竟。

什么是荧光报告Cre工具鼠？

利用基因工程技术手段，将“loxP-STOP-loxP (LSL)-Reporter gene”插入到小鼠基因组内，这样构建的小鼠模型就称为Cre报告工具鼠^[1]。常见的报告基因包括β-半乳糖苷酶（lacZ）报告基因、荧光素酶（luciferase）报告基因和荧光报告基因，以荧光蛋白作为报告基因的小鼠就称为荧光报告Cre工具鼠。常用的荧光报告基因包括绿色荧光蛋白EGFP/ZsGreen，黄色荧光蛋白EYFP，青色荧光蛋白ECFP，红色荧光蛋白mCherry/tdTomato等^[2]。

图1. Cre报告工具鼠策略图^[1]

当荧光报告工具鼠与Cre工具鼠杂交，双阳性子代通过Cre介导的重组使得报告基因在特定细胞类群中启动表达，从而实现了细胞荧光标记和谱系追踪^[3]，还可用于监测重组酶的活性和表达范围^[4]。荧光报告系统已被用于检测基因编辑效果，Alapati等人使用Rosa26-mT/mG双荧光报告小鼠证明在胎儿发育过程中CRISPR-Cas9基因编辑试剂在子宫内的精确定时递送会导致胎儿肺中靶向和特异性基因编辑^[5]。

除此之外，Cre常与Dre工具鼠联用进行谱系追踪[6]，记录肝脏中的细胞增殖^[7]，追踪癌症转移和纤维化中的EMT^[8]，并阐明心脏干细胞在心脏修复过程中的作用^[9]。

荧光报告Cre工具鼠模型优势

1.自发荧光，非酶促反应

相对于荧光素酶和β-半乳糖苷酶，荧光血清自发性荧光不用再加入底物，激光散斑简易。

2.颜色多用

有区别的颜色的荧光蛋白质质或蛋白质质变体可供使用，同样屏幕上显示许多上皮细胞类形。

3.定量分析

用荧光显微镜或流式的血细胞术可参考值探讨荧光的对于描述标准。

图2. R26R-Confetti小鼠：随机多色的Cre荧光报告鼠^[3]

集萃ob电竞官网入口 荧光报告Cre工具鼠品系

1.红色荧光报告工具鼠 T058417 H11-CAG-LSL-tdTomato

本品系在一身体现的CAG开启子后无线连接1个具有LSL回文序列的tdTomato，并将其敲入小鼠15号染料体的H11的安全位点。当Cre整顿酶发生时，伴随loxP整顿，小鼠基因遗传组中的STOP误删除，tdTomato被体现并在光线增进发布出熠熠生辉的桔红色荧光。

图3. H11-CAG-LSL-tdTomato建模方法攻略 表示图

部分验证数据展示：

图4. H11-CAG-LSL-tdTomato模形荧光成相查重

Cre-：H11-CAG-LSL-tdTomato单阳型小鼠；Cre+：Rosa26-EIIA-iCre,H11-CAG-LSL-tdTomato 双弱阳小鼠

2.绿色荧光报告工具鼠 T057823 Rosa26-CAG-LSL-EGFP-3xHA-WPRE-polyA

本品系在全身上下描述的CAG重启子后进行连接一两个帶有LSL队列的EGFP，并将其敲入小鼠-6染色剂体的Rosa26防护位点。当Cre整体上市酶现实存在时，因为loxP整体上市，小鼠dna组组中的STOP被移除，EGFPdna组描述被激活卡，产生了浅绿色荧光蛋清。

图5. Rosa26-CAG-LSL-EGFP-3xHA-WPRE-polyA模型工具策略性举手图

部分验证数据展示：

图6. Rosa26-CAG-LSL-EGFP-3xHA-WPRE-polyA3d模型荧光影像判断

Cre-：Rosa26-CAG-LSL-EGFP-3xHA-WPRE-polyA单阳性反应小鼠；Cre+：TgTn(pb-CAG-iCre)，Rosa26-CAG-LSL-EGFP-3xHA-WPRE-polyA 双呈阳性小鼠

3.双色荧光报告工具鼠 T006163 H11-CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato (B6-G/R)

本品系在混身描述的CAG启动的子后联系某个双荧光通知单什么是人类基因ZsGreen和tdTomato，并将其敲入小鼠 16号刺绣体的H11安全性位点。当Cre合拼酶具有时，犹豫loxP合拼，小鼠什么是人类基因组中的ZsGreen和STOP被移除，小鼠将由混身泛绿会变色成不同组织结构的红光。

图7. B6-G/R对模型原则示图图

部分验证数据展示：

图8. CAG-G/R三维模型荧光显像检查测量

Cre-：B6-G/R单阳型小鼠；

Cre+：Rosa26-EIIA-iCre，B6-G/R 双抗体阳性小鼠

图9. B6-G/R建模方法普鲁士蓝染色受损细胞术定量分析

Cre-：B6-G/R单弱阳小鼠，

Cre+：H11-Cd4-iCre，B6-G/R双呈阳性小鼠

相关品系：

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借鉴资料：[1]Li, Siang, and Cord Brakebusch. "Reporter Mice for Gene Editing: A Key Tool for Advancing Gene Therapy of Rare Diseases." Cells 13.17 (2024): 1508.[2]Ghim, Cheol-Min, et al. "The art of reporter proteins in science: past, present and future applications." (2010).[3]Snippert, Hugo J., et al. "Intestinal crypt homeostasis results from neutral competition between symmetrically dividing Lgr5 stem cells." Cell 143.1 (2010): 134-144.[4]Bittner-Eddy, Peter D., Lori A. Fischer, and Massimo Costalonga. "Cre-loxP reporter mouse reveals stochastic activity of the Foxp3 promoter." Frontiers in immunology 10 (2019): 2228.[5]Alapati, D., et al. "In utero gene editing for monogenic lung disease. Sci Transl Med 11." (2019).[6]Tang, Juan, et al. "Arterial Sca1+ vascular stem cells generate de novo smooth muscle for artery repair and regeneration." Cell stem cell 26.1 (2020): 81-96.[7]He, Lingjuan, et al. "Proliferation tracing reveals regional hepatocyte generation in liver homeostasis and repair." Science 371.6532 (2021): eabc4346.[8]Li, Yan, et al. "Genetic fate mapping of transient cell fate reveals N-cadherin activity and function in tumor metastasis." Developmental cell 54.5 (2020): 593-607.[9]Li, Yan, et al. "Genetic lineage tracing of nonmyocyte population by dual recombinases." Circulation 138.8 (2018): 793-805.