1、PCR假阴性（扩增条带弱或无条带）

A 特征

● 试样的条带就没有办法扩张或条带弱；

● 阳性对照同样没有条带或条带极弱；

B  原因

● 目的片段条带过大导致扩增效率低；

● DNA模板质量较差或扩增体系不合适（扩增酶扩增效率不高或PCR程序不合适等）；

● PCR仪温控模块差异；

C  解决方式

● 设计备用引物，尽量缩短PCR产物大小；

● 使用试剂盒提取纯化DNA模板或优化鉴定体系（建议参照集萃ob电竞官网入口 推荐的程序进行鉴定）；

● 可尝试使用三步法PCR程序进行扩增，同时由于仪器、操作等环节依然存在变量，若上述处理无法改善，建议梯度测试最优退火温度。

2、PCR假阴性（泳道弥散状、伴随核酸挂孔或较严重的引物二聚体现象）

A  特征

● 胶孔大量发光，DNA无法脱离胶孔；

● 泳道出现弥散状抹带，通常伴随挂孔现象；

● 在胶图的最下方，常有比较明显的非目的条带；

B  原因

● DNA通过碱裂解、一步法试剂盒提取，未经纯化使用，蛋白裹在核酸上，导致核酸无法跑出胶孔；

● DNA模板附着较多杂质，影响引物的退火结合；

● 弥散的泳道通常为一些降解的核酸片段；

C  解决方式

● 重新纯化提取DNA或稀释DNA模板（降低杂质比例）；

● 更换备用引物或者使用高效率的扩增酶；

● 及时电泳，避免扩增产物长时间存放室温或4℃冰箱。

3、PCR假阳性（出现扩增污染）

A  特征

● 阴性对照、空白对照出现不符合预期的条带，通常会稍弱于阳性样品的主带，偶有与主带完全相同的亮度；

● 常发生于PCR产物小于500bp的反应中，产物越小，污染可能性越高；

B  原因

● 样品交叉污染，包括DNA模板、扩增体系配置或者电泳时污染；

● 气溶胶污染，少量样品鉴定时偶发，大批量样品鉴定、或者长时间使用同一对引物鉴定时发生频率明显增高；

C  解决方式

● 轻微污染时，提高退火温度、减少3-5循环、稀释DNA模板同时进行；

● 污染严重时，重新设计备用引物检测，条带不小于500bp，同时使用上述调整体系。

4、PCR特异性差（存在非特异性条带）

A  特征

除依据条带外，出现其余特男人增加的终产品，很多时候非特男人终产品与依据带取决于，印象没想到断定；

B  原因

● 引物不特异；

● 酶的效率太强、退火温度偏低、退火延伸时间过长；

C  解决方式

● 非特异性扩增条带较弱时，提高退火温度、减少3-5循环、稀释DNA模板同时进行，可有效抑制非特异性扩增；

● 非特异性扩增条带较强时（杂带亮度与目的带几乎一样或者更亮），重新设计PCR引物。

5、PCR优势扩增

A  特征

被检生命居于杂合环境时，将会会发生较短视频段等位dnaPCRPCRPCR扩增生成物远超或少于较长场面描写PCRPCRPCR扩增生成物，甚至会将会很多条带完成不能PCRPCRPCR扩增；

B  原因

● 当一个PCR反应中存在超过一种产物时，不同的产物会存在竞争性扩增，导致其中一种产物的产量远大于其他产物；

● 通常小条带比大条带更容易扩增，且两条带差距越大，优势扩增现象越明显；

● 个别情况下，比如产物序列存在特殊结构，也会出现大条带优势扩增现象；

C  解决方式

集萃ob电竞官网入口 检测细则为避免显示显示主要胜机测序要素，基本两种带差异超越300bp，会依次制作引物用到印证，避免显示显示主要胜机测序显示。

6、电泳条带弯曲

A  特征

电泳后果出显“微笑的表情状条带”；

B  原因

备制琼脂糖妇科凝露时，蒸煮后侧分水量蒸馏，产生琼脂糖妇科凝露中的电泳液含量，高出电泳槽中的电泳液含量。此情此景胶孔中的PCR物质，中央区域内渗透强度快，有接近电泳液的物质渗透强度慢，展露出可怕的弯度；

C  解决方式

烧开，然凝露后，必须使用分馏水，增加减压蒸馏的球体积，必须小心慢慢使用，并另外饱满摇晃，预防边缘室内降温过快，从而导致凝露冷凝不饱满产生了凝固。

7、实际电泳条带与目的带大小不符

A  特征

经历与Marker或相关對照有点，实际上胶图上的的目的带与技术鉴定计划方案中标单位记的物品大小不一不符合；

B  原因

● 凝胶问题（质量较差、浓度较低）或者电泳时间不合适；

● Marker质量问题；

● 序列更新或标记的产物大小有偏差；

C  解决方式

● 调整凝胶浓度、电泳条件等条件（建议参照集萃ob电竞官网入口 推荐的电泳体系）；

● 更换合适品牌的Marker；

● 尝试使用备用引物。

在同一条个PCR反應工作体系中，来源于的2种或这两种大于的PCR有机物时，有所相互影响的有机物增加质量来源于的相互影响，就是指PCR的优点增加现状（如图已知示1，有机物②的增加质量很大大于有机物①)。

简图 1

表现形式：

当几种产品的GC的含量表示、产品上都不会出现个性化形式且扩展精力十分时，小条带的PCR扩张错误率不低于大条带的PCR扩张错误率。

产生原因：

①原因Taq酶在致使反复的性变-热处理回火-交叉时中，酶的活性氧在不间断决定（平常35-40嵌套嵌套循环系统后酶截然解离），而20-40嵌套嵌套循环系统中随着时间推移酶活的决定，大情节代谢物的交叉丰度错误率也小臭决定，而小情节的交叉错误率受决定较小，故PCR嵌套嵌套循环系统中，小情节代谢物的扩张含磷量将长远于大情节的代谢物；②局部反應保障体系中，引物针对范例的脆弱性较低，若在PCR嵌套再循环系统的初期关键时期（前5-10嵌套再循环系统），早已引起了非常多的小场面副化合物丰度，这么未果的嵌套再循环系统中，大多都数反應会以小场面的副化合物作为一个范例实行PCR扩增；这几个问题附加，会造成小段落货物的份量长远于大段落货物的份量（可以达到指数公式级的差别），故电泳时，小条带色度调节将博超出大条带的色度调节，恐怕仍然没有加测到大条带的发生。

优化方案：

将鉴定会有差异表观遗传型的症状，各是实施PCR测序，即在结构设计PCR设计时，特选每张生成物的非特异朋友验正设计（平常分辨超小条带为管用测序条带，大条带尽管是否有测序成功率，鉴于存在着高风险较少，未有分辨的使用）。同一优化方案设计：①根换国产品牌更优的taq酶，让高不断循环法数时的酶活尽可能的用一些恢复最 佳的情形；②根换PCR扩增引物，尽可能的用一些不要低不断循环法的物质生物富集。

特殊情况：

在哪几种结果的场面具有构成上的一定的差异性、或具有显然的GC占比区分时，长处增加的结果将换成GC平滑、且没有专业构成的那份心底的结果，此吸收率或是也可以铺盖可以达到条带主产生的增加吸收率一定的差异性。下图示2已知，结果①的GC占比平滑，但结果②的GC占比特别高，故即便结果②条带远值为结果①,但增加吸收率始终是结果①极高。

构造 2

什么是核酸气溶胶污染？

核酸气溶胶新鲜空气中严重的影响源源， 即 DNA/RNA 气溶胶新鲜空气中严重的影响源源，是测试室中很易发现的一项新鲜空气中新鲜空气中严重的影响源源。新鲜空气中与液的液面矛盾， 离心法分离机离心法分离，激烈摇晃反响管， PCR 开盖，移液器总是吸样， 新鲜空气中严重的影响源源物外泄等前提均会会产生核酸气溶胶 。相似新鲜空气中严重的影响源源的的危害关于 PCR 测试可是十分明显 ：极少量的核酸气溶胶新鲜空气中严重的影响源源, 就行造成 PCR PCR扩增假阳型。 

气溶胶污染的表现形式：

● PCR 实验设计中， 以去铝离子水为模具的 PCR 乙酰乙酸， 也能够测序出效果条带， 在确诊管理体制被破坏的 、样本间重叠被破坏的的情况发生下， 既能看做存在的气溶胶被破坏的；

● 由于此类污染的 PCR 扩增模板实际为游离的气溶胶核酸片段， 通常情况下为核酸碎 片 ， 且含量极低， 对于大片段的 PCR 扩增影响较小， 故通常出现在 PCR 产物大小在80-500bp 的 PCR 反应中。

气溶胶污染的预防及清理措施：

● 良好的实验习惯： PCR 实验前， 使用 75%乙醇， 进行桌面 、移液器的擦拭； 实验过程 中 ， DNA 提取 、 引物溶解 、 PCR 体系配置时，尽量避免剧烈震荡， EP 管的开关尽量轻柔，如发生样品飞溅时，及时使用 75%乙醇擦拭 2 次。

● 实验室环境控制 ：保持每天至少 4 个小时的通风， 尤其是冬夏开空调时期， 气溶胶污染高发。

● 当已经发现气溶胶污染时， 除了上述操作外， 我们会每天增加 8 小时的紫外照射， 并 开启实验室的负压通风装置， 由于气溶胶污染的顽固性， 通常 3 -4 周， 才可以完全清 除 。 而对于进行中的 PCR 实验， 我们建议在超净台/通风橱进行 PCR 实验， 开封新的试剂 、耗材（EP 管 、 引物 、酶 、 去离子水等） ， 由于气溶胶核酸片段不完整 、含量较 低， 所以提高 PCR 程序中的退火温度， 同时降低 3 -5 个循环， 效果也比较明显； 条件 允许时， 可以尝试更换 PCR 扩增区域， 将扩增片段控制在 800bp 左右， 也可以有效避免此类问题。

NCG是使用的染色体修改技术水平敲不仅NOD/ShiltJGpt小鼠的Prkdc（Protein kinase, DNA activated, catalyticpolypeptide）及 Il2rg（Common gamma chain receptor）染色体而取得的严重免役偏差品系。Prkdc染色体功能模块缺位从而带来T内部系和B内部系不能够骨骼发育心智非常成熟。IL2RG是许多白内部系介素内部系指数公式多巴胺受体的共同的亚基，IL2RG灭活则带来的许多差异内部系指数公式数据信息通道缺位，从而带来NK内部系偏差。由于，NCG是到现在结束结束免役模式偏差最彻底清除的小鼠仿真模型之六，缺少心智非常成熟的T内部系、B内部系和NK内部系，暂不会出现近年来时长的提高有免役内部系渗漏的具体情况。